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目前市場上主流Protein A產(chǎn)品是GE生產(chǎn)的以瓊脂糖為基質(zhì)的產(chǎn)品,連續(xù)流層析,也是早商業(yè)化的產(chǎn)品。瓊脂糖為基質(zhì)的Protein A 介質(zhì)具有載量高,親水性能好,非特異性吸附低等優(yōu)點(diǎn),但瓊脂糖介質(zhì)天然缺陷是機(jī)械強(qiáng)度差,因此也被稱為軟膠。由于該介質(zhì)耐壓性能差,生產(chǎn)中需要降低柱高、減小流速以防止壓力過高造成柱床塌陷,單分散層析介質(zhì),限制了抗l體批處理量及抗l體生產(chǎn)效率。軟膠Protein A 另外一個缺陷是傳質(zhì)速度慢,主要原因是軟膠孔徑較小,排阻大。因此軟膠Protein A 都需要駐保留時間長,流速慢條件下,抗l體吸附載量才會比較高,但在高流速下動態(tài)載量下降的非常快。因此一個理想的抗l體純化用Protein A 介質(zhì)需要具有高流速,高載量,高機(jī)械強(qiáng)度,及更長的使用壽命等特點(diǎn)。Protein A 介質(zhì)載量是由微球孔徑,比表面積,配基密度來決定的;機(jī)械強(qiáng)度則是由Protein A基球材料化學(xué)組成,交聯(lián)度及孔隙率來決定的;Protein A 配基脫落及使用壽命主要由配基,基球性能及偶聯(lián)方式來決定。實(shí)現(xiàn)Protein A 親和介質(zhì)的國產(chǎn)化需要從底層開始。
用于傳統(tǒng)小分子的分離方法如重結(jié)晶、精餾等對生物分子具有破壞性,因此基本上不能用于生物大分子分離純化,使得生物大分子的分離面臨極大挑戰(zhàn)。層析技術(shù)具有極高的分離純化效率,且條件溫和,Protein A 介質(zhì),在分離純化過程中容易保持生物分子的活性,因此層析技術(shù)已成為生物分離的主要的工具。層析分離過程是把混合樣品從裝有層析柱的一端進(jìn)去,層析介質(zhì),由于不同生物分子其尺寸、電荷、疏水等物理性能有差異,使得其與層析柱填充的介質(zhì)作用力(或吸附強(qiáng)度)不同,導(dǎo)致不同分子在層析柱保留時間不同,因此不同組分的分子可以按順序從柱子另外一端流出來以達(dá)到分離的目的。層析分離效果主要取決于其層析柱中的層析介質(zhì)微球。由于層析分離純化技術(shù)牽涉到材料、生物、化學(xué)等交叉技術(shù)領(lǐng)域,因此層析介質(zhì)制備技術(shù)門檻高,用于生物分離的層析介質(zhì)中國基本依賴進(jìn)口。
生物分子的分離可以根據(jù)其尺寸大小、表面電荷、疏水性能、及與配基的親和作用性能的差異分別采用分子篩,離子交換,疏水,親和等層析分離模式。為了率把目標(biāo)生物分子從復(fù)雜樣品里分離出來,并保持其生物活性,用于分離純化的層析介質(zhì)材料必須滿足苛刻的要求。層析介質(zhì)的性能主要取決于其介質(zhì)材料組成、形貌、粒徑大小、粒徑分布、孔徑大小和分布、功能基團(tuán)、及表面親水性能等。
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