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發(fā)布時間：2021-10-17 05:32
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Elisa試劑盒的安全性
8. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
2. 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
3. 底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
4. 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
5. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
Elisa試劑盒——Elisa實驗常見問題及解決方案
顯色淡，靈敏度偏低
1 試劑盒未充分平衡 試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）
2 樣品不適合做ELISA檢測 樣品一般選擇培養(yǎng)上清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測或者需要優(yōu)化檢測的條件（例如稀釋液的成分）
3 酶標板在貯存或洗后拍干時過分干燥 防止板過于干燥
4 包被遭到破壞 操作溫和，移液槍不能碰到孔底
5 樣本和孵育條件不合適 按照說明書條件，建議孵育過程中全程振蕩孵育。
6 洗滌浸泡時間過長 按照說明書操作。勿人為增加浸泡時間；
7 偶聯(lián)HRP試劑污染 棄去試劑，重新配置
8 錯誤的稀釋偶聯(lián)HRP試劑 棄去試劑，重新配置
9 TMB底物孵育時間過短，因非人為因素影響，需要優(yōu)化孵育時間 確定合適的孵育時間：人為判定-高濃度的標準品出現(xiàn)深藍色；S4-5有淡藍色；機器判定620 nm波長下測定OD值達到0.6-0.65
10 樣本濃度過高或存在基質(zhì)效應 建議做不同稀釋倍數(shù)，確認樣本稀釋倍數(shù)。
11 濾光片設(shè)置有問題或者波長選擇不對 確認儀器設(shè)置及選擇正確的波長檢測。
12 酶標板不適合做ELISA 不能使用細胞培養(yǎng)板，建議使用ELISA高吸附力板子。
背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2）
1 洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標記物殘留 洗液準確配制；充分洗滌，靜置15秒，徹底拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應棄去不用，不要反復使用，否則易造成污染。
2 底物污染，未避光保存，出現(xiàn)顏色 棄去底物，重新配置
3 樣品稀釋液污染 棄去稀釋液，重新配置
4 吸頭重復使用，未洗凈或消毒不徹底 吸頭盡可能一次性使用
5 不正確的孵育時間，溫度（尤其是底物孵育的時間） 常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。完全按照說明書要求。
6 偶聯(lián)抗體（streptavidin-HRP）濃度過高 按照說明書調(diào)整到合適的濃度
7 ELISA板子不正確的貯存 酶標板貯存于2-8 ℃；使用結(jié)合力低點的Elisa板
8 沒有正確封閉 在標準品稀釋液中加入動物蛋白或延長封閉時間
9 樣本溶血嚴重 建議使用非溶血或輕微溶血樣本，嚴重溶血樣本會導致背景偏高。
不正常的標準曲線
1 錯誤的方法重懸標準品 加入正確量的溶液重懸標準品，重懸充分
2 標準品稀釋錯誤 按照說明書要求稀釋標準品
3 標準品污染 使用一次性的滅菌吸頭， 標準品貯存于2-8 ℃
4 錯誤的倍比稀釋步驟 按照說明書倍比稀釋標準品
5 波長選擇錯誤 TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用，而 前者比色波長為450nm，后者為492nm。雙波長比色分析優(yōu)于單波長。
6 標準品混用 不同批號試劑勿混用
7 試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高，標準品失活 盡量縮短運輸時間，夏季應放冰塊降溫
8 ELISA未終止而直接檢測450nm和620nm TMB顯色需終止后檢測，否則會出現(xiàn)620nm比450nm讀數(shù)高的現(xiàn)象。（數(shù)值仍有梯度規(guī)律）
