武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術公司;公司實驗中心有分子生物學平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。
亞細胞定位是指某種蛋白或表達產(chǎn)物在細胞內的具體存在部位。例如在核內、胞質內或者細胞膜上存在。GFP是綠色熒光蛋白,在掃描共聚焦顯微鏡的激光照射下會發(fā)出綠色熒光,從而可以地定位蛋白質的位置。
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由稻瘟菌(Magnaporthe grisea)引起的稻瘟病是重要的水稻病害之一。以研究稻瘟菌致病基因為中心,探討致病相關基因的種類及其功能,生理小種和致病基因的關系,致病基因的遺傳分離和在群體中的轉移規(guī)律等等,能夠為水稻抗瘟性研究和稻瘟病化學防治、生物防治提供理論基礎。 本研究利用在實驗室已經(jīng)建成的根癌農介導的稻瘟菌T-DNA插入突變體庫,挑選了7個致病力缺陷的突變體,提取基因組DNA,PCR檢測確認T-DNA的插入。利用DW-ACP-PCR(DNA Walking-Annealing Control Primer-PCR)技術對T-DNA右邊界側翼序列進行擴增,7個突變體都獲得了特異條帶。對這些特異條帶進行并測序,其中5個測序成功,另外2個測序失敗。將成功的序列與稻瘟菌基因組和NCBI數(shù)據(jù)庫比對,發(fā)現(xiàn)1個為載體pCAMBIA1300序列,4個與稻瘟菌的基因組相似性達93%~99%,認為是T-DNA插入位點的側翼序列。
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以擬南芥金屬離子轉運體基因AtZIP1(GenBank登錄號:AAC24197)的氨基酸序列為信息探針,從水稻(Oryza sativa L.)中分離得到OsZIP7a和OsZIP8兩個鋅鐵轉運體基因,OsZIP7a和OsZIP8分別編碼384和390個氨基酸殘基的產(chǎn)物。OsZIP7a和OsZIP8與ZIP家族成員有著高度的同源性,均包含8個跨膜區(qū),有著高度保守的ZIP結構,在第3和第4跨膜區(qū)之間存在一個可變區(qū),可變區(qū)富含組氨酸。半定量RT-PCR分析結果表明,OsZIP7a和OsZIP8在水稻根、莖、葉和幼穗等組織中均呈低水平表達;在缺鐵處理時,OsZIP7a基因在水稻幼苗根部的表達量增多,而在地上部的表達未明顯增多;在缺鋅處理的水稻幼苗中,洋蔥亞細胞定位怎么做,OsZIP8基因的表達量顯著增多。構建OsZIP7a::GFP瞬時表達載體,采用農介導法轉化洋蔥表皮細胞,結果表明,OsZIP7a::GFP定位于洋蔥表皮細胞的質膜上。構建酵母表達載體pFL61-OsZIP7a和pFL61-OsZIP8,利用醋酸鋰方法分別轉入酵母雙突變株fet3fet4DEY1453和zrt1zrt2ZHY3中,設pFL61空載體為陰性對照,分別在低鐵和低鋅的酵母YPD培養(yǎng)基中進行酵母功能互補實驗。
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