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高效液相色譜儀在生物制藥中的應(yīng)用
高效液相色譜儀是近幾十年發(fā)展起來(lái)的一種高效、快速的分離分析技術(shù),是現(xiàn)代分離檢測(cè)的重要工具。高效液相色譜儀是以經(jīng)典液相色譜儀為基礎(chǔ),引入氣相色譜儀的理論和實(shí)驗(yàn)方法,將流動(dòng)相改為高壓輸送,采用高效固定相和在線檢測(cè)等手段,高效液相色譜報(bào)價(jià),發(fā)展而成的分離分析技術(shù),具有高壓、高速、高效、高靈敏度、高選擇性和應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn),成為生物制藥領(lǐng)域發(fā)展快、應(yīng)用廣的現(xiàn)代分析技術(shù)之一。
二、高效液相色譜儀在檢測(cè)藥含量方面的應(yīng)用:
藥與人類(lèi)的健康、生活質(zhì)量的提高關(guān)系極大,許多藥品由于受到純度的影響,效果不能充分發(fā)揮,甚至產(chǎn)生毒副作用;有時(shí)服用前需作各種試驗(yàn),帶來(lái)很多麻煩,高效液相色譜儀的檢測(cè)就比較簡(jiǎn)單,是分離與純化藥的較佳選擇。由于高效液相色譜儀具有靈敏度高、快速簡(jiǎn)便和專(zhuān)一性的特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于藥分析,特別在干擾較多的時(shí)候表現(xiàn)得比其它方法好。
三、高效液相色譜儀在檢測(cè)制藥廢水中的應(yīng)用:
制藥廢水中的殘留藥成分對(duì)環(huán)境造成的污染越來(lái)越嚴(yán)重, 制藥廢水的治理已成為環(huán)境保護(hù)工作中相當(dāng)重要的方面。
HPLC概述
高效液相色譜法(HPLC)是上個(gè)世紀(jì)七十年代迅速發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)高效、快速的分析分離技術(shù),是現(xiàn)代分離測(cè)試的重要手段。
色譜法的分離原理是:溶于流動(dòng)相(mobile phase)中的各組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí),由于與固定相(station phase)發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強(qiáng)弱不同,在固定相中滯留時(shí)間不同,高效液相色譜,從而先后從固定相中流出。又稱(chēng)為色層法、層析法。
HPLC是在經(jīng)典的液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的,其以液體作為流動(dòng)相,并采用顆粒極細(xì)的高效固定相的柱色譜分離技術(shù)。其分離機(jī)制與常規(guī)柱色譜相同,但填料更加精細(xì),高效液相色譜哪個(gè)穩(wěn)定性好,需高壓泵推動(dòng),柱效高,分析速度快。
與氣相色譜不同的是液相色譜中流動(dòng)相亦參與組分的分離過(guò)程,其組成、比例和pH值可靈活調(diào)節(jié),分離模式多樣。在實(shí)際操作中主要通過(guò)改變流動(dòng)相的組成來(lái)調(diào)節(jié)樣品在色譜柱的保留值和選擇性,從而使不同樣品得到分離。
高效液相色譜法的應(yīng)用范圍十分廣泛,對(duì)樣品的適用性廣,不受分析對(duì)象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制,幾乎所有的化合物包括高沸點(diǎn)、極性、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用高效液相色譜法分析測(cè)定,因而彌補(bǔ)了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機(jī)化合物中,可用氣相色譜分析的約占20% ,而80% 則需用高效液相色譜來(lái)分析。
液相色譜柱的再生
因?yàn)?,色譜柱是消耗品,隨著使用時(shí)間或進(jìn)樣次數(shù)的增加,會(huì)出現(xiàn)色譜峰高降低,峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象,一般來(lái)說(shuō)是柱效的下降。
1.反向柱的再生:
2.正相柱的再生:
3.離子交換柱的再生:
長(zhǎng)時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣,將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降。用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽(yáng)離子柱再生,反之,高效液相色譜哪家質(zhì)量好,用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。
特別說(shuō)明:
再生過(guò)程必須隨時(shí)關(guān)注柱壓變化,柱壓過(guò)高易導(dǎo)致硅膠變形與開(kāi)裂及鍵合相極性端連接順序紊亂,同時(shí)要保證再生時(shí)間足夠。再生時(shí)盡量選擇不具備在線脫氣的獨(dú)立泵送系統(tǒng)色譜儀器進(jìn)行
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