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病毒相對(duì)于宏觀世界物質(zhì)甚至與細(xì)菌相比都是極其微小的生物體,但與傳統(tǒng)蛋白及核酸生物分子相比,其尺寸又大很多,結(jié)構(gòu)也復(fù)雜得多。病毒結(jié)構(gòu)通常由蛋白質(zhì)組成外衣殼,由核酸組成內(nèi)芯,因此比蛋白和核酸分子都要復(fù)雜很多。病毒尺寸一般在20-100納米之間,而細(xì)菌尺寸一般在1000納米以上,蛋白分子尺寸往往在10納米以下。人們只能借助電子顯微鏡才能看到病毒的結(jié)構(gòu)和形貌。雖然多肽,蛋白,疏水層析介質(zhì),核酸等生物大分子都有成熟的分離純化方法,層析介質(zhì),但病毒到目前也沒(méi)有一個(gè)比較理想的分離方法。
層析介質(zhì)粒徑大小及均勻性對(duì)生物分離的影響
層析介質(zhì)粒徑大小和分布是影響其分離性能很重要的參數(shù)之一。粒徑越小,分布越均勻,單分散層析介質(zhì),柱效越高,分辨率越高。因此制備精l確的粒徑大小及高度的粒徑均一性的單分散層析介質(zhì)一直是業(yè)界追求的目標(biāo)。納微成功開發(fā)出單分散大孔聚合物層析介質(zhì)可以用于分離生物大分子。納微單分散層析介質(zhì)的研發(fā)成功不僅填補(bǔ)國(guó)內(nèi)這一領(lǐng)域的空白,也為世界單分散層析介質(zhì)的發(fā)展做出貢獻(xiàn)。
小粒徑無(wú)孔單分散層析介質(zhì)用于病毒的分離純化
傳統(tǒng)的層析介質(zhì)填料都是多孔的微球,因?yàn)槎嗫孜⑶虿牧系谋缺砻娣e大,因而可以對(duì)一般生物分子分離提供較高的吸附載量。層析介質(zhì)的孔徑一般都小于2000?(通常都小于100納米)。而很多病毒顆粒的粒徑一般都大于20納米,有的甚至都超過(guò)100納米。由于體積排阻的原因,病毒顆粒無(wú)法擴(kuò)散進(jìn)入層析介質(zhì)的孔內(nèi),因而在層析吸附病毒顆粒時(shí)只有介質(zhì)微球的外表面可以利用,孔內(nèi)表面積由于體積排阻的原因而無(wú)法吸附病毒顆粒。然而,病毒樣品中的雜質(zhì)分子一般都比病毒小,因而可以擴(kuò)散進(jìn)入層析介質(zhì)孔內(nèi)被吸附在里面。由于傳統(tǒng)層析介質(zhì)孔內(nèi)表面積遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于介質(zhì)微球外表面積,雜質(zhì)吸附往往由于孔內(nèi)表面積的存在而非常顯著,吸附洗脫時(shí)雜質(zhì)含量因而較高,病毒顆粒純化效果往往不理想。無(wú)孔層析介質(zhì)由于沒(méi)有大量只能容納雜質(zhì)進(jìn)入而病毒顆粒無(wú)法擴(kuò)散進(jìn)入的內(nèi)孔,病毒顆粒在介質(zhì)外表面的層析吸附量雖然不會(huì)有明顯變化,但樣品中的雜質(zhì)被層析吸附的量會(huì)顯著減少。因此經(jīng)無(wú)孔層析填料層析洗脫后,病毒樣品的分離純度顯著提高。
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