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分析試劑盒配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 溫育:操作同3。 洗滌:操作同5。 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
注意事項
1.為保證得到理想的實驗結果,在使用此試劑盒之前請認真閱讀該注意事項;
2.試劑(尤其是小瓶裝的試劑)在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落;
3.Propidium iodide(PI)能通過皮膚吸收,睛有刺激作用;
4.此試劑盒僅供科研使用,不宜用于臨床診斷;
5.細胞的洗滌同常規(guī)方法。
就是具有自動清洗程序的全自動生化分析儀也有交叉污染,例如Beckman 全自動生化分析儀CX4,它的試劑針(probe)、樣品吸樣針及反應攪拌棒是利用高壓沖洗洗液沖洗,然后用高壓壓縮空氣吹干,有時由于洗液壓力和壓縮空氣壓力偏低,使試劑吸針、樣品針及反應攪拌棒沖洗不干凈、吹不干,從而導致反應池之間相互污染、試劑間交叉污染,是檢驗結果偏離。另一個值得注意的問題是許多生化儀器由于長期頻繁的利用,使加樣針和試劑針的磨損加重或的“特氟龍”吸頭不及時更換,使吸樣針或試劑針密封層增大,產生泄露現(xiàn)象也是造成樣本間及實際間項目污染的一個重要原因。
Mg放在ALP等含有鎂離子項目后面可能會使檢測結果偏高或重復性差。Ca放在a-amy項目后面可能會使檢測結果偏高或重復性差,Mg試劑(calmagite法)中含有EGTA,會干擾Ca的測試結果。另外我們發(fā)現(xiàn)相鄰兩個項目的PH值相差較大或反應對PH要求嚴格的項目,也會對測定結果產生影響, TBA放在TP,ALB,UA,后邊測定,會使測定結果偏低等等。解決辦法:a、調整試驗的前后順序來消除這種影響;b、在造成污染的項目和受污染的項目之間設置清洗并設定清洗的次數(shù)。