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基于上述微球結(jié)構(gòu)與發(fā)光機(jī)理,pva材料,時間分辨熒光微球相比于普通熒光微球具有以下特點(diǎn):(1)內(nèi)部包埋工藝--無染料表面,便于偶聯(lián)(2)熒光強(qiáng)度--較普通的紅色或綠色熒光微球來講熒光強(qiáng)度更高(3)Stokes位移--較普通熒光微球要大(大部分在250nm以上)
(4)半衰期--熒光壽命長,抗干擾能力強(qiáng)(時間分辨熒光壽命通常在100μs以上,較普通熒光微球的熒光壽命高出幾個數(shù)量級,這是由于稀土配合物的發(fā)光是經(jīng)過配體激發(fā)態(tài)能量轉(zhuǎn)移所致)(5)穩(wěn)定性--稀土離子配合物的穩(wěn)定性較普通熒光高,批間差異更穩(wěn)定
蛋白質(zhì)可通過多種方式共價交聯(lián)到微球表面。微球表面含有環(huán)氧基、氯、醛基、羧基等基團(tuán),煙臺pva,都可以和的Fc端的氨基反應(yīng),形成共價鍵。當(dāng)選擇共價交聯(lián)方式的時候,往往需要考慮交聯(lián)的效期、工藝復(fù)雜程度和后的帶電狀況。
種基團(tuán)可以直接與蛋白的氨基反應(yīng),pva廠家,形成共價鍵,使用起來較方便,但儲存穩(wěn)定性較之羧基微球稍差。而羧基微球則需經(jīng)過EDC/NHS活化之后,才與蛋白的氨基反應(yīng),形成共價鍵。由于羧基微球本身不具有直接和蛋白質(zhì)反應(yīng)的性能,因此具有較強(qiáng)的化學(xué)穩(wěn)定性。兩種方法各有優(yōu)缺,在選擇的時候,需根據(jù)本身的情況進(jìn)行選擇。
乳膠微球(60nm-500nm)可應(yīng)用于微粒增強(qiáng)濁度法,以多為基礎(chǔ)的改良比濁分析法,利用基因工程方法將與乳膠微粒結(jié)合,當(dāng)抗原相結(jié)合時便形成了抗原--乳膠微粒復(fù)合物,增強(qiáng)了反應(yīng)吸光度,反應(yīng)液在一定波長處比濁,與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)液比較,計算標(biāo)本中抗原的含量。利用生化分析儀進(jìn)行比濁測定,整個分析過程只需幾分鐘,該方法與傳統(tǒng)比濁法比較其靈敏度更高,可達(dá)ng/ml或pg/ml。
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