實(shí)驗(yàn)室微生物檢測(cè)常用解決方案【世紀(jì)久海】

微生物計(jì)數(shù)

1.血細(xì)胞計(jì)數(shù)法

將稀釋的菌液樣品滴在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上，在顯微鏡下計(jì)算4~5個(gè)中格的細(xì)菌數(shù)，并求出每個(gè)小格所含細(xì)菌的平均數(shù)，再以此為依據(jù)，估算總菌數(shù)。

①此法的缺點(diǎn)是不能區(qū)分死菌和活菌。

②對(duì)壓在小方格界線上的細(xì)菌，應(yīng)當(dāng)取平均值計(jì)數(shù)。

③此法可用于測(cè)定培養(yǎng)液中酵母jun種群數(shù)量的變化

2.稀釋涂布平板法

原理:每個(gè)活細(xì)菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長(zhǎng)條件下可以通過(guò)生長(zhǎng)形成菌落。培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。

①這一方法常用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目

②統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，原因是當(dāng)兩個(gè)活多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。因此統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來(lái)表示。

③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細(xì)菌、酵母、芽孢與孢子等的數(shù)量均可用此法測(cè)定。但不適于測(cè)定樣品中絲狀體微生物，例如放線jun或絲狀真菌或絲狀藍(lán)細(xì)菌等的營(yíng)養(yǎng)體等。

④此法若不培養(yǎng)成菌落，可通過(guò)將一定量的菌液均勻地涂布在玻片上的一定面積上，經(jīng)固定染色后在顯微鏡下計(jì)數(shù)，這樣又稱涂片計(jì)數(shù)法。染色可用臺(tái)盼藍(lán)，臺(tái)盼藍(lán)能使死細(xì)胞染成藍(lán)色，可分別計(jì)數(shù)死細(xì)胞和huo細(xì)胞。

微生物限度檢查

計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)

   1.供試液制備

   根據(jù)供試品的理化特性與生物學(xué)特性，采取適宜的方法制備供試液。供試液制備若需加溫時(shí)，應(yīng)均勻加熱，且溫度不應(yīng)超過(guò)45℃。供試液從制備至加入檢驗(yàn)用培養(yǎng)基，不得超過(guò)1 小時(shí)。

   常用的供試液制備方法如下。如果下列供試液制備方法經(jīng)確認(rèn)均不適用，應(yīng)建立其他適宜的方法。

   （1）水溶性供試品 取供試品，用pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或pH7.2磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基溶解或稀釋制成1：10供試液。若需要，調(diào)節(jié)供試液pH值至6～8。必要時(shí)，用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋。水溶性液體制劑也可用混合的供試品原液作為供試液。因此，微生物培養(yǎng)特性的觀察也是微生物檢驗(yàn)鑒別中的一項(xiàng)重要內(nèi)容。

   （2）水不溶性非油脂類供試品 取供試品，用pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或pH7.2磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基制備成1：10供試液。分散力較差的供試品，可在稀釋液中加入表面活性劑如0.1%的聚山梨酯80，使供試品分散均勻。若需要，調(diào)節(jié)供試液pH值至6～8。必要時(shí)，用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋。——大腸gan菌簡(jiǎn)介——大腸埃希氏菌(Escherichiacoli)通常被稱為大腸gan菌，是Escherich在1885年發(fā)現(xiàn)的，在相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)，一直被當(dāng)作正常腸道菌群的組成部分，認(rèn)為是非致病菌。

   （3）油脂類供試品 取供試品，加入無(wú)菌十四烷酸異丙酯使溶解，或與zui少量并能使供試品乳化的無(wú)菌聚山梨酯80或其他無(wú)抑菌性的無(wú)菌表面活性劑充分混勻。表面活性劑的溫度一般不超過(guò)40℃（特殊情況下，zui多不超過(guò)45℃），小心混合，若需要可在水浴中進(jìn)行，然后加入預(yù)熱的稀釋液使成1：10供試液，保溫，混合，并在zui短時(shí)間內(nèi)形成乳狀液。必要時(shí)，用稀釋液或含上述表面活性劑的稀釋液進(jìn)一步10倍系列稀釋。食源病原微生物可通過(guò)接觸物表面、水、土壤、空氣、排泄物、食物等媒介傳播，從而污染“從農(nóng)田到餐桌”的食物鏈任何環(huán)節(jié)。

2.薄膜過(guò)濾法

   除另有規(guī)定外，按計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法進(jìn)行供試液制備。取相當(dāng)于1g、1ml或10c㎡供試品的供試液，若供試品所含的菌數(shù)較多時(shí)，可取適宜稀釋級(jí)的供試液，照方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法加至適量稀釋液中，立即過(guò)濾，沖洗，沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)。30-2010食品安全標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)GB4789。

   培養(yǎng)和計(jì)數(shù) 培養(yǎng)條件和計(jì)數(shù)方法同平皿法，每張濾膜上的菌落數(shù)應(yīng)不超100cfu。

   菌數(shù)報(bào)告規(guī)則 以相當(dāng)于1g、1ml或10c㎡供試品的菌落數(shù)報(bào)告菌數(shù)；若濾膜上無(wú)菌落生長(zhǎng)，以<1報(bào)告菌數(shù)（每張濾膜過(guò)濾1g、1ml或10c㎡供試品），或<1乘以zui低稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù)。