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你對(duì)制備色譜陌生嗎？還不進(jìn)來(lái)看看它的特點(diǎn)

很多初接觸色譜領(lǐng)域的朋友對(duì)制備色譜這個(gè)名詞比較陌生。其實(shí)，在化學(xué)化工醫(yī)學(xué)等廣泛采用的層析法以及薄層色譜就是較為典型的制備色譜，換句話說(shuō)，將分析色譜的進(jìn)樣量增大，同時(shí)得出大量的所需物質(zhì)（餾分）的過(guò)程就可以稱為制備色譜。分析色譜的目的，是分析出混合物中一個(gè)（或者幾個(gè)）純物質(zhì)的含量。制備色譜的目的，是從混合物中得到純物質(zhì)。而制備色譜系統(tǒng)則是利用制備色譜的思想能得到純化物質(zhì)的多個(gè)分析測(cè)試設(shè)備聯(lián)用的總稱。     分析色譜是制備色譜的基礎(chǔ)。當(dāng)我們?cè)诜治錾V上取得了良好的分離效果時(shí)，可以將其放大，應(yīng)用到制備色譜上，由此，我們需要考慮調(diào)整上樣量，流速，梯度：     

1.上樣量的調(diào)整：     他與分析色譜柱和制備色譜柱的柱長(zhǎng)和柱內(nèi)徑有關(guān)：     

具體關(guān)系時(shí)；制備柱上樣量/分析柱上樣量=制備柱長(zhǎng)/分析柱長(zhǎng)*制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方；     

2.流速的調(diào)整：     

制備柱流速/分析柱流速=制備柱體積/分析柱體積=制備柱長(zhǎng)/分析柱長(zhǎng)制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方；     

3.梯度的調(diào)整：     

制備柱梯度/分析柱梯度=制備柱體積/分析柱體積*制備柱流速/分析柱流速；

液相色譜操作要求     

1、液相開(kāi)機(jī)前先檢查洗針液、柱塞清洗液是否足夠；     2、液相開(kāi)機(jī)后，首先確保柱塞清洗運(yùn)行，再執(zhí)行其它操作。     3、開(kāi)機(jī)排氣時(shí)，有“purge”閥的儀器應(yīng)先打開(kāi)“purge”閥再開(kāi)泵以5ml/min的流速排氣，關(guān)“purge”閥的時(shí)候先把流速降到 1ml/min再關(guān)，切不可吧順序弄反，否則系統(tǒng)壓力會(huì)瞬間變高。     4、使用自動(dòng)進(jìn)樣器時(shí)，建議啟用“洗針進(jìn)樣”方式，以降低樣品殘留，對(duì)于有些強(qiáng)殘留的物質(zhì)可以選擇降低濃度或減小進(jìn)樣量。     5、液相色譜系統(tǒng)壓力高時(shí)考慮色譜柱堵了，如果將液相色譜換成兩通壓力依舊高，應(yīng)該考慮系統(tǒng)管路某部分堵了。管路堵的情況下可以使用熱水清洗。對(duì)堵塞的通道可以用熱水清洗。

液相色譜不是堵就是漏，原因很簡(jiǎn)單！

使用液相色譜儀的小伙伴肯定會(huì)遇到漏氣和漏液的狀況，流動(dòng)相是造成液相色譜各種問(wèn)題的主要源頭。液相色譜常見(jiàn)的故障一是堵，二是漏。今天就這兩部分別展開(kāi)討論 。首先，為何會(huì)堵?“堵”的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，主要原因就是流動(dòng)相里有雜質(zhì)，雜質(zhì)的主要來(lái)源就是細(xì)菌。

制備液相色譜特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)

高壓—壓力可達(dá)150~300Kg/cm2。色譜柱每米降的壓為75 Kg/cm2以上。

高速—流速為0.1~10.0 ml/min。

高效—可達(dá)5000塔板每米。在一根柱中同時(shí)分離成份可達(dá)100種。

高靈敏度—紫外檢測(cè)器靈敏度可達(dá)0.01ng。同時(shí)消耗樣品少。

HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點(diǎn)：

速度快—通常分析一個(gè)樣品在15~30 min，有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成。

分辨率高—可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到較好分離效果。

靈敏度高—紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測(cè)器可達(dá)0.1pg。

柱子可反復(fù)使用—用一根色譜柱可分離不同的化合物。

樣品量少，容易回收—樣品經(jīng)過(guò)色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。