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原位雜交技術(shù)可應(yīng)用于什么方面

1.細胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位　可用于基因圖譜、基因表達和基因組進化的研究。

2.感6染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位，如EB病毒mRNA、人類乳3頭狀瘤病毒和巨細胞病毒DNA的檢測。

3.癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達及其變化的檢測。

４.基因在染色體上的定位。

5.檢測染色體的變化，如染色體數(shù)量異常和染色體易位等。

6.分裂間期細胞遺傳學(xué)的研究，如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳

熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization, FISH）是一種分子細胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀80年代末期發(fā)展起來的一種非放6射性原位雜交技術(shù)。目前這項技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感5染分析、人類產(chǎn)前診斷、腫5瘤遺傳學(xué)和基因組進化研究等許多領(lǐng)域。FISH的基本原理是用熒光標記的單鏈核酸為探針，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行特異性結(jié)合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。可用熒光標記的探針直接與染色體進行雜交從而對基因進行染色體定位。

雜交技術(shù)zui重要的因素之一是選擇zui適的雜交反應(yīng)溫度。若反應(yīng)溫度低于Tm 10～15℃，堿基順序高度同源的互補鏈可形成穩(wěn)定的雙鏈，錯配對減少。若反應(yīng)溫度再低（Tm-30℃），雖然互補鏈之間也可形成穩(wěn)定的雙鏈，但互補堿基配對減少，錯配對增多、氫鍵結(jié)合的更弱。如兩個同源性在50%左右或更低些的DNA，調(diào)整雜交溫度可使它們之間的雜交率變化10倍，因此在實驗前必須首先確定雜交溫度。通常有三種溫度可供試驗，即zui適復(fù)性溫度、苛刻復(fù)性溫度及非苛刻復(fù)性溫度。溫度的選擇及溫度對雜交的影響見表18-3。

zui適復(fù)性溫度（Optimunm renaturation temperature, TOR）：Tor =Tm –25℃

苛刻復(fù)性溫度：Ts = Tm – (10或15℃)

非苛刻復(fù)性溫度：Tns =Tm – (30或35℃)