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發(fā)布時間:2021-06-09 07:54  






原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對特定核酸順序進(jìn)行精3確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。

原位雜交技術(shù)(In situ hybridization,ISH)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合而產(chǎn)生的一門新興技術(shù),始于20世紀(jì)60年代。

原位PCR;原位雜交細(xì)胞定位和PCR的高靈敏度相結(jié)合的技術(shù),在細(xì)胞(爬片、甩片或涂片)或組織(石蠟、冰凍切片)上直接對靶基因片段進(jìn)行擴(kuò)增,通過摻入標(biāo)記基團(tuán)直接顯色或結(jié)合原位雜交進(jìn)行檢測的方法。



原位雜交是指;分子雜交的一種形式。由未經(jīng)抽提分離的染色體DNA,在原來位置上被變性成單鏈后,與探針進(jìn)行分子雜交。1977年由本頓(W.D.Benton)和戴維斯(R.W.Davis)在原分子雜交基礎(chǔ)上發(fā)展的一種較新的分子雜交技術(shù)。方法是將菌落或噬菌斑轉(zhuǎn)移到硝9酸纖維素濾膜上,使在原位發(fā)生溶菌后變性的DNA,同濾膜原位結(jié)合,再與有放5射性同位素標(biāo)記的特定核苷酸“探針”雜交,其結(jié)果可用放5射自顯影來顯示,出現(xiàn)銀粒的地方便是待測染色體DNA上與探針互補順序所在的位置。對快速檢測轉(zhuǎn)化群落中的DNA序列或任何一種插入的DNA序列,以及動植物的基因定位工作,都具有廣泛應(yīng)用價值。(見“分子雜交”、“放5射自顯影”、“影印培養(yǎng)技術(shù)”)



原位雜交(In Situ Hybridization)也叫原位雜交組化(in situ hybridization histochemistry, ISHH),是一種固相分子雜交的方法,bai它是用標(biāo)記的DNA或RNA為探針,在原位檢測組織或細(xì)胞內(nèi)特定核酸序列的方法。探針的種類按所帶標(biāo)記物可分為同位素標(biāo)記探針和非同位素標(biāo)記探針兩大類。常用的同位素標(biāo)記物有3H、35S、125I和32P,非同位素標(biāo)記物中目前很常用的有生物素、地高6辛和熒光素三種。探針的種類按核酸性質(zhì)不同又可分為DNA探針、cDNA探針、RNA探針和合成寡核苷酸探針。

原位雜交術(shù)可在原位檢測細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá),有很高的敏感性和特異性,已成為細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。



原位雜交組織(或細(xì)胞)化學(xué)技術(shù)簡稱原位雜交(In situ hybridization, ISH)是應(yīng)用已知堿基順序并帶有標(biāo)記物的核酸探針與組織細(xì)胞內(nèi)待測的核酸,按堿基互補配對原則進(jìn)行特異性結(jié)合,形成雜交體,然后用與標(biāo)記物相應(yīng)的檢測系統(tǒng),通過組織化學(xué)或免3疫組織化學(xué)方法在核酸原有位置進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)定位、定性和定量研究。為分子水平研究細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)及有關(guān)細(xì)胞5因子的調(diào)控提供了有效的工具。可視為組織化學(xué)與免3疫組織化學(xué)的重大突破。

原位雜交不需要從組織中提取核酸,對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性,并可完整地保護(hù)組織和細(xì)胞的形態(tài),更能準(zhǔn)確地反映出組織細(xì)胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。





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