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有效使用小型發(fā)酵罐以及發(fā)酵變化
如何有效使用小型發(fā)酵罐以及發(fā)酵過程的變化,如何我們經(jīng)常使用到小型發(fā)酵罐來做各種科研實驗,那么在操作中得到很好的利用是一個非常重要的課題,還有在發(fā)酵的過程中一些細微的變化。
小型發(fā)酵罐分批培養(yǎng)過程中大腸桿i菌的菌體生長狀況,通過控制發(fā)酵過程的溫度、溶氧、攪拌速度、空氣流量、泡沫水平等參數(shù),并每小時取樣測OD值和還原糖量,制作菌體生長曲線,以此判斷大腸桿i菌的生長發(fā)酵狀況。結果表明大腸桿i菌在發(fā)酵的前三個小時處于生長延遲期,發(fā)酵3~6小時為對數(shù)生長期,發(fā)酵6小時后該菌開始進入平衡期,第8小時時結束發(fā)酵實驗。
發(fā)酵罐是進行液體發(fā)酵的特殊設備。生產(chǎn)上使用的發(fā)酵罐容積大,均用鋼板或不銹鋼板制成;供實驗室使用的小型發(fā)酵罐,其容積可從約1L至數(shù)百升或稍大些。一般來說,5L以下是用耐壓玻璃制作罐體,10 L以上用不銹鋼板或鋼板制作罐體。發(fā)酵罐配備有控制器和各種電極,可以自動地調控試驗所需要的培養(yǎng)條件,是微生物學、遺傳工程、醫(yī)i藥工業(yè)等科學研究所必需的設備。
在當今市場上,各廠家生產(chǎn)的發(fā)酵罐會有所差別,但基本原理是相同的,基本結構是類似的。本實驗使用的是BIOTECH-7BGZ發(fā)酵罐,其結構主要又罐體和控制器兩大部分組成,罐體為一硬質玻璃圓筒,底和頂兩端用不銹鋼板及橡膠墊圈密封構成,容積為5L,頂蓋上有多個孔口,分別是加料及接種口補料口、放置 DO(溶解氧)電極口、放置pH電極口、放置消泡電極口、放置取樣管口等;本罐可配置不同性能的控制器,控制器能完成最基本的功能。
閥門宜采用軟密封
閥門是在發(fā)酵設備中使用最多的附屬設備,其中使用最多的是截止閥。閥門對介質的密封性可分為4級,即公稱級、低漏級、蒸汽級和原子級。公稱級與低漏級密封適用于關閉要求不嚴密的閥門,例如用于控制流量的閥門。蒸汽級密封適用于蒸汽和大部分其他工業(yè)用閥門的閥座、閥桿和閥體連接部的密封。原子級密封適用于介質密封性要求極高的場合,如宇宙飛船和原子能動力設備等。由于發(fā)酵工業(yè)中使用高溫蒸汽對發(fā)酵設備進行滅菌,因此閥門對介質的密封性要求是蒸汽級密封。
由于在發(fā)酵過程中閥門開啟頻繁,經(jīng)常受介質腐蝕、沖刷和氣蝕的損害,因此對于閥門副結構,即閥座與關閉件互相接觸進行關閉的部分的選擇較為關鍵。閥門副結構的密封分為軟密封和硬密封兩種。硬密封的密封副結構是靠閥座與關閉件互相擠壓發(fā)生微小彈塑性變形而形成一條閉合的圓形密封接觸線。雖然這類閥門在應用初期密封效果良好,但是發(fā)酵閥門開啟比較頻繁,容易磨損先前形成的接觸線,或者由于管道不清潔而使密封面產(chǎn)生壓痕而損壞。而硬密封的密封副結構彈性變形量很小,形成新的密封接觸線很困難,因此長期使用可能導致閥門泄漏,使發(fā)酵失敗。軟密封的閥門關閉件一般采用軟質墊片,利用墊片較大的彈塑性形變形成較寬的環(huán)形密封接觸帶,以添塞密封面上的不平、消除間隙形成密封。其加工精度一般要求不高,如有特殊要求,閥體材料可采用不銹鋼,軟密封關閉件用可更換的聚四氟乙烯墊片,這樣可通過經(jīng)常更換聚四氟乙烯墊片來保證閥門的密封性。
發(fā)酵罐有著哪些廣泛的應用?
發(fā)酵罐發(fā)酵過程中,為了能對生產(chǎn)過程進行必要的控制,我們需要對有關參數(shù)進行定期取樣測定或進行連續(xù)測量,以確定其參數(shù)對于發(fā)酵罐發(fā)酵過程的影響程度。發(fā)酵罐反映發(fā)酵過程變化的參數(shù)可以分為兩類:一類是可以直接采用特定的傳感器檢測的參數(shù)。它們包括反映物理環(huán)境和化學環(huán)境變化的參數(shù),如溫度、壓力、攪拌功率、轉速、泡沫、發(fā)酵液粘度、濁度、pH、離子濃度、溶解氧、基質濃度等,稱為直接參數(shù)。
另一類是至今尚難于用傳感器來檢測的參數(shù),包括細胞生長速率、產(chǎn)物合成速率和呼吸嫡等。這些參數(shù)需要根據(jù)一些直接檢測出來的參數(shù),借助于電腦計算和特定的數(shù)學模型才能得到,因此這類參數(shù)被稱為間接參數(shù)。上述參數(shù)中,發(fā)酵罐對發(fā)酵過程影響較大的有溫度、pH值和溶解氧濃度等。
發(fā)酵罐溫度對發(fā)酵過程的影響是多方面的,它會影響各種酶反應的速率,改變菌體代謝產(chǎn)物的合成方向,影響微生物的代謝調控機制。除這些直接影響外,溫度還對發(fā)酵液的理化性質產(chǎn)生影響,如發(fā)酵液的粘度、基質和氧在發(fā)酵液中的溶解度和傳遞速率、某些基質的分解和吸收速率等,進而影響發(fā)酵的動力學特性和產(chǎn)物的生物合成。發(fā)酵罐發(fā)酵溫度是既適合菌體的生長,又適合代謝產(chǎn)物合成的溫度,它隨菌種、培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)條件和菌體生長階段不同而改變。理論上,整個發(fā)酵過程中不應只選一個培養(yǎng)溫度,而應根據(jù)發(fā)酵的不同階段,選擇不同的培養(yǎng)溫度。在生長階段,應選擇最適生長溫度,在產(chǎn)物分泌階段,應選擇最適生產(chǎn)溫度。
但實際生產(chǎn)中,由于發(fā)酵液的體積很大,升降溫度都比較困難,所以在整個發(fā)酵過程中,往往采用一個比較適合的培養(yǎng)溫度,使得到的產(chǎn)物產(chǎn)量最i高,或者在可能的條件下進行適當?shù)恼{整。發(fā)酵罐發(fā)酵溫度可通過溫度計或自動記錄儀表進行檢測,通過向發(fā)酵罐的夾套或蛇形管中通人冷水、熱水或蒸汽進行調節(jié)。發(fā)酵罐工業(yè)生產(chǎn)上,所用的大發(fā)酵罐在發(fā)酵過程中一般不需要加熱,因發(fā)酵中釋放了大量的發(fā)酵熱,在這種情況下通常還需要加以冷卻,利用自動控制或手動調整的閥門,將冷卻水通人夾套或蛇形管中,通過熱交換來降溫,保持恒溫發(fā)酵。
微生物發(fā)酵的最適氧濃度與臨界氧濃度是不同的。前者是指溶解氧濃度對生長或合成有一最適的濃度范圍,后者一般指不影響菌體呼吸所允許的最i低氧濃度。為了避免生物合成處在氧限制的條件下,需要考察每一發(fā)酵過程的臨界氧濃度和最適氧濃度,并使其保持在最適氧濃度范圍。發(fā)酵罐在供氧方面,主要是設法提高氧傳遞的推動力和氧傳遞系數(shù),可以通過調節(jié)攪拌轉速或通氣速率來控制。同時要有適當?shù)墓に嚄l件來控制需氧量,使菌體的生長和產(chǎn)物形成對氧的需求量不超過設備的供氧能力。發(fā)酵罐發(fā)酵液的需氧量,受菌體濃度、基質的種類和濃度以及培養(yǎng)條件等因素的影響,其中以菌濃的影響最為明顯。發(fā)酵液的攝氧率隨菌濃增大而增大,但氧的傳遞速率隨菌濃的對數(shù)關系減少。
發(fā)酵罐的特性可以滿足哪些發(fā)酵需求?
發(fā)酵罐其實就是一種生物反應器,發(fā)酵罐是指為活i細胞或酶提供適宜的反應環(huán)境,讓他們進行細胞增殖或生產(chǎn)的裝置系統(tǒng)。發(fā)酵罐為細i菌的生長和繁殖提供適宜的生長環(huán)境,促進菌體生產(chǎn)人們需要的產(chǎn)物。機械攪拌發(fā)酵罐是利用機械攪拌器的作用,使空氣和發(fā)酵液充分混合,促使氧在發(fā)酵液中溶解,以保證供給微生物生長繁殖、發(fā)酵所需的氧氣。
一、發(fā)酵罐的基本要求:
1)結構嚴密,發(fā)酵罐經(jīng)得起蒸汽的反復滅菌,內壁光滑,耐腐蝕性能好,以利于滅菌徹底和減小金屬離子對生物反應的影響;
2)有良好的氣一液一固接觸和混合性能與高效的熱量、質量、動量傳遞性能;
3)發(fā)酵罐在保持生物反應要求的前提下,降低發(fā)酵罐能耗;
4)有良好的熱量交換性能,以維持生物反應最適溫度;
5)有可行的管路比例和儀表控制,發(fā)酵罐適用于滅菌操作和自動化控制。