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什么是制備性液相色譜
液相色譜是一種分析方法,制備色譜是一種分離純化手段。液相色譜把普通的色譜柱換成制備柱,就是制備液相色譜,兩者的區(qū)別在于一種以分析為目的,追求的是檢測精度,樣品承載量非常小;制備色譜以分離純化為目的,它追求的是樣品承載量,檢測精度很低,檢測只用作鑒別即可。
另外,制備色譜不僅可以用液相,還可以用氣相色譜、薄層色譜、層析柱等多種載體,目前主流的制備色譜是高速逆流色譜
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制備液相色譜含義
制備液相色譜是指采用色譜技術(shù)制備純物質(zhì),即分離、收集一種或多種色譜純物質(zhì).制備色譜中的'制備'這一概念指獲得足夠量的單一化合物,以滿足研究和其它用途.制備色譜的出現(xiàn),使色譜技術(shù)與經(jīng)濟(jì)利益建立了.制備量大小和成本高低是制備色譜的兩個重要指標(biāo).其中,氣相制備色譜主要用于石油化工產(chǎn)品和揮發(fā)性天然產(chǎn)物的色譜純樣品制備。
液相色譜儀分類
液相色譜儀依據(jù)樣品在固定相和流動相分離過程的物理化學(xué)原理,可分為以下五種。
1、吸附色譜:
用固體吸附劑作固定相,以不同極性溶劑作流動相,依據(jù)樣品中各組分在吸附劑上吸附性能的差別來實現(xiàn)分離。
2、分配色譜:
用載帶在固相基體上的固定液作固定相,以不同極性溶質(zhì)作流動相,依據(jù)樣品中各組分在固定液上分配性能的差別來實現(xiàn)分離。根據(jù)固定相和液體流動相相對極性的差別,又可分為正相分配色譜和反相分配色譜。當(dāng)固定相的極性大于流動相的極性時,可稱為正相分配色譜或簡稱正相色譜;若固定相的極性小于流動相的極性時,可稱為反相分配色譜或簡稱反相色譜。
3、離子色譜:
用微粒離子交換劑作固定相,以具有一定pH值的緩沖溶液作流動相,依據(jù)離子型化合物中各離子組分與離子交換劑上表面帶電荷基團(tuán)進(jìn)行可逆性離子交換能力的差別而實現(xiàn)分離。
4、體積排阻色譜:
用化學(xué)惰性的多孔性凝膠作固定相,按固定相對樣品中各組分分子體積排阻滯作用的差別來實現(xiàn)分離。以水溶液作流動相的體積排阻色譜柱,稱為凝膠過濾色譜;以有作流動相的體積排阻色譜法,稱為凝膠滲透色譜法。
5、親和色譜:
以在不同基體上,鍵合多種不同特性的配位體作固定相,用具有不同pH值的緩沖溶液作流動相,依據(jù)生物分子與基體上鍵聯(lián)的配位體之間存在特異性親和作用能力的差別,而實現(xiàn)對具有生物活性的生物分子的分離。
液相色譜的注意事項
特別提示
1).流動相均需色譜純度,水用20M的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。2).柱子是非常脆弱的,首先做的方法,先不要讓液體過柱子。
3).所有過柱子的液體均需嚴(yán)格的過濾。
4).壓力不能太大,盡量不要超過150kgf/cm2.
5).因為緩沖試劑遇有機(jī)的溶劑,會結(jié)晶,有損色譜柱,所以,每次由有機(jī)相變流動相或流動相變有機(jī)相均需用蒸餾水清洗。