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色譜柱如何沖洗?用于反相層析柱的沖洗:在下列溶劑中,每個(gè)色譜柱至少25 mL,清洗色譜柱無(wú)緩沖鹽的流動(dòng)相1000%腈 25%異100%正己烷*如果使用己烷-沖洗色譜柱,則必須先用異沖洗色譜柱,然后再使用反相流相!!!用于正相色譜柱的沖洗:以50 mL以上的溶劑沖洗色譜柱(分析柱)。50% 500%醋酸。
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氣相色譜柱如何老化?裝上色譜柱后,先將色譜柱加熱至少3倍,再將載氣流速調(diào)至正常流速,并從100度升溫至老化溫度快速升至老化溫度。陳化溫度——在樣品分析終溫20度以上,但未超過(guò)色譜柱恒溫溫度上限的狀態(tài)下,通過(guò)恒溫2小時(shí)的方法快速老化,新的毛細(xì)管色譜柱迅速老化,當(dāng)色譜柱老化時(shí),升溫速度沒(méi)有限制,可以用升溫速率老化色譜柱。18.液相色譜儀的重要組成部分是什么?液體有什么檢測(cè)器?脫氣裝置,泵,溫度計(jì),自動(dòng)進(jìn)樣器,檢測(cè)器。探測(cè)器有:VWD可變波長(zhǎng)檢測(cè)器、 DAD二極管陣列檢測(cè)器、 MWD多波長(zhǎng)檢測(cè)器、 RID檢測(cè)器、示差檢測(cè)器、 FLD熒光檢測(cè)器。溶劑進(jìn)口過(guò)濾器如何選擇?傳統(tǒng)和毛細(xì)液相使用的溶劑過(guò)濾頭有:20μ m玻璃過(guò)濾頭(5041-2168)、 PTFE連接頭(5062-8517)、不銹鋼過(guò)濾頭(5062-8517)、不銹鋼過(guò)濾頭(01018-60025)配制液相用的溶劑過(guò)濾頭有:40μ m玻璃過(guò)濾頭(3150-0944)和 PTFE接頭頭7 mm/4 mm (G1361-23204)如果流動(dòng)相涉及下列溶劑,應(yīng)避免使用不銹鋼過(guò)濾頭:碘化鋰、、高濃度的及硫酸,有機(jī)酸溶液中的1%會(huì)腐蝕不銹鋼、和異或 THF混合液等。每天用35%的浸泡玻璃濾芯一小時(shí)(不用超聲波清洗,造成玻璃)。
聯(lián)用的定量經(jīng)驗(yàn):1、要用目標(biāo)離子的碎片定量,特征性強(qiáng),排除干擾;2、在定量分析方法設(shè)置上,盡可能提高掃描速度,提高準(zhǔn)確率和重復(fù)性(通過(guò) a減少掃描質(zhì)量數(shù)的范圍,可增加目標(biāo)峰的掃描次數(shù),或?qū)⒁粋€(gè)樣品全部分析時(shí)間斷分為 n個(gè) segments,對(duì)目標(biāo)離子單獨(dú)設(shè)置掃描模式);3、經(jīng)色譜柱分離后,一定要進(jìn)行定量分析,避免競(jìng)爭(zhēng)性離子的存在影響目標(biāo)離子的離子化效率;如果目標(biāo)分子沒(méi)有從競(jìng)爭(zhēng)分子中完全分離,則使目標(biāo)分子的離子化效率降低,造成樣品分子的定量結(jié)果偏低,當(dāng)然標(biāo)準(zhǔn)濃度樣品也應(yīng)采用同樣的方法進(jìn)行分析。4、如果樣品全部是純品,無(wú)需通過(guò)色譜柱直接進(jìn)樣分析,包括做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的樣品(盡管不推薦直接進(jìn)樣分析)。5、如果所用的離子源的噴針位置是可移動(dòng)的,一定要記得在做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)時(shí)做其位置,否則其位置移動(dòng)后在相同條件下進(jìn)入質(zhì)譜的離子流量會(huì)發(fā)生變化,標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)就不能使用了!不改變 shealthgas和 auxgas的流速,否則對(duì)進(jìn)入質(zhì)譜的樣品數(shù)量都會(huì)產(chǎn)生影響,這將影響到質(zhì)譜的樣品數(shù)量。
建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)一個(gè)月后,如要重復(fù)使用,就用 QC樣品來(lái)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)!7、對(duì)掃描范圍、流動(dòng)相組成、梯度、流速等方面不做任何改動(dòng),否則應(yīng)重做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。目標(biāo)峰掃描次數(shù)、流動(dòng)相組成改變了離子化效率,流速改變了色譜峰的保留時(shí)間和峰寬。離子阱的優(yōu)點(diǎn)在于多層-定性層,而四級(jí)柱的強(qiáng)項(xiàng)在于量化;對(duì)熱穩(wěn)定性差的樣品,增加氣速,降低毛細(xì)管溫度,保證定量的重現(xiàn)性,一旦該方法固定后,不要輕易改變。
泵用后不能及時(shí)清洗移動(dòng)相中不得含有腐蝕性物質(zhì),含有緩沖液的流動(dòng)相不能留在泵中,特別是當(dāng)泵停泵過(guò)夜或更久時(shí)。若含有緩沖液的流動(dòng)相留在泵中,可能會(huì)析出鹽的微晶,如上述固體顆粒那樣損壞密封環(huán)和柱塞,甚至只是因?yàn)槿芤禾幱陟o止?fàn)顟B(tài)時(shí),會(huì)析出。所以,必須用純水將泵完全清洗干凈,然后轉(zhuǎn)換成適合于保存色譜柱和有利于泵維護(hù)的溶劑(對(duì)于反相鍵合硅膠固定相,可能是或-水)流相去空水泵工作時(shí)要注意防止溶劑瓶?jī)?nèi)的流動(dòng)相被用完,否則泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會(huì)磨損柱塞、氣缸或密封環(huán),終造成泄漏。如果沒(méi)有流動(dòng)相的外流,沒(méi)有壓力指示怎么辦?也許是泵內(nèi)有大量的氣體,此時(shí)可開(kāi)啟泄壓閥,使泵在較大流量(如5 ml/min)下運(yùn)轉(zhuǎn),排出氣泡,也可用一個(gè)50 ml的針筒在泵出口協(xié)助抽氣。另外一個(gè)可能的原因是密封環(huán)磨損需要更換。
不穩(wěn)定的壓力和流量其原因可能是需要排除的氣泡;或單向閥內(nèi)有異物,可卸下單向閥,浸入內(nèi)超聲清洗。有時(shí)候可以是砂濾棒內(nèi)部出現(xiàn)氣泡,或者被細(xì)小鹽?;蜃躺⑸锊糠侄氯?,此時(shí),可卸下砂濾棒浸入流動(dòng)相超聲除氣泡,或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸(如4 mol/L)中迅速除去微生物,或?qū)Ⅺ}溶解,再立即清洗。為什么壓力太大還是太低?也許是管道堵塞了,需要清理清理。另一種可能是由于管道出現(xiàn)了泄漏。檢驗(yàn)阻塞或泄漏時(shí),應(yīng)逐段進(jìn)行。采用梯度洗脫時(shí),由于多種溶劑混和,組分不斷變化,產(chǎn)生了一些特殊問(wèn)題,必須引起足夠的重視。PS:(在液相色譜中對(duì)成分復(fù)雜的樣品,采用梯度洗脫法。在同一分析周期內(nèi),不停地改變流動(dòng)相的濃度比例,稱(chēng)為梯度洗脫。這樣,在一個(gè)復(fù)雜樣品中,性質(zhì)差異較大的組分,就能達(dá)到各自合適的容量因子 k的分離效果。
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對(duì)萃取柱進(jìn)行活化處理:選一種溶劑經(jīng) SPE小柱潤(rùn)濕、活化后,試著將該填料與固相表面緊密接觸,容易吸附,也能去除柱中可能存在的雜質(zhì),減少污染;然后,選擇一種極性和 pH值與樣品基體相似的溶液替代溶劑,使樣品溶液與吸附劑表面良好接觸,提高萃取效率。SPE的一般做法是:采用選擇性吸附和選擇性洗脫的色譜分離原理,使液體樣品經(jīng)過(guò)吸附劑,保留其中的分析物,用適當(dāng)強(qiáng)度的溶劑洗去雜質(zhì),再用少量的溶劑洗脫,達(dá)到快速分離、凈化和濃縮的目的。固相萃取小柱還具有選擇性吸附干擾雜質(zhì)的作用,在使用合適的溶劑時(shí),讓分析物清洗,或同事吸附雜質(zhì)和分析物,選擇洗脫分析物的操作。
當(dāng)樣品經(jīng)過(guò) SPE柱時(shí),固相對(duì)分析物吸附在固體表面,其它組分則隨樣品母液流經(jīng)柱,然后用適當(dāng)?shù)娜軇┫疵?,固相萃取過(guò)程中固相對(duì)分析物的吸引力要大i。SPE本身按其原理可分為四類(lèi):反向 SPE (RPSPE)、正 SPE (NPSPE)、離子交換性 SPE (IESPE)、吸附 SPE (Absorption)。固相萃取大多用于處理液體樣品,用于提取、濃縮和凈化樣品中的揮發(fā)性和半揮發(fā)性化合物;如果需要作為固體樣品使用,首先要將固體樣品處理成液態(tài)。隨著單一 SPE處理數(shù)量的增加,固相萃取小柱分析器的時(shí)效性將變得頻繁而復(fù)雜,人為誤差很大地影響處理樣品的重現(xiàn)性,不利于定量分析結(jié)果的定量分析工作。
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