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ELISA試劑盒的應用技術
ELISA檢測試劑盒應用定性夾心檢測技術,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM,這些就會與HEV 的多肽抗原結合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結合物,經第二次孵育后,酶結合物就會與孵育結合上的HEV IgM相結合,洗板除去未結合的酶結合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應,只有那些含有HEV IgM和酶結合物所形成的復合物的孔才會發(fā)生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應,并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgMelisa試劑盒的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。
ELISA試劑盒的發(fā)展前景
臨床測定技術的發(fā)展主要在于方法學的發(fā)展,而方法學的發(fā)展依托于試劑生產技術不斷進步更新和型標記物的應用。分子生物學正在并肯定會讓對整個生命科學有一個徹底的認識,其對測定技術發(fā)展的影響也是直接而又有效的,對以些難以檢測的生物活性物質的測定,并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。
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Elisa試劑盒實驗原理
將目標包被于微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標準品或標本,其中的目標連接于固相載體上的結合,然后加入微生物化的目標,將未結合的生物素洗凈后,加入HRP標記和親和素,再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關。在450nm波長下測定吸光度(O.D.值),計算樣品濃度。
Elisa試劑盒原理及用途
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測肌肉組織、牛奶等樣品中的米松(Dexamethasone,DEX),試劑盒由預包被偶聯(lián)抗原的酶標板、酶標記物、、標準品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標準品或樣品溶液,樣本中的米松藥品和酶標板上預包被偶聯(lián)抗原競爭抗米松藥類,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含米松藥品含量成負相關,與標準曲線比較即可得出樣本中米松藥品的殘留量。