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從脫氣機出來的流動相進入高壓泵許多情況下，泵的問題都反映在壓力上，壓力波動是常見的一類問題，泵的正常壓力波動一般在2%以內(nèi)，這個異常波動通常是由于氣泡和鹽引起的：如果流動相中的氣泡沒有被脫氣機除掉，那么就會引起壓力波動，通常我們可以通過重新 purge流和再脫氣流來解決。由于鹽引起的波動，主要是由于流動相中添加了濃度較高的緩沖鹽，在含鹽流動相和有機相中，鹽會發(fā)生微小的析出，從而引起壓力異常波動，解決這些問題可以考慮適當(dāng)降低鹽的濃度，或者用代替有機相。若因各種原因必須使用此流動相，可考慮在有機相中加入一定比例的水，然后適當(dāng)提高梯度結(jié)束點。

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替代流動相的過程有時會發(fā)生在泵的使用過程中，取代流動相是指取代正相溶劑，或反過來取代溶劑的過程，這個過程重要的是與流動相的兼容性，常用的正反相色譜溶劑是不可互溶的，所以在更換中間，一定要用異沖洗系統(tǒng)，保證管路中所有原有的溶劑都被異取代。流程繼續(xù)進行進樣，進入進樣器，進樣器分為手動和自動兩類。

HPLC的 HPLC經(jīng)驗：【1】泵壓跳動，跳動范圍約10 bar。對策：原來的小白頭有點臟，換了之后還沒有解決；2、將主動閥上的閥芯取出后，發(fā)現(xiàn)類似氣泡存在，在超聲5分鐘內(nèi)浸入-水溶液中試著除去氣泡，重新安裝后觀察，仍未解決；更換新閥芯，安裝完畢后，再也沒有跳動，觀察一段時間后比較平穩(wěn)，順利解決?！?】失敗原因：①plug homing over pressure②注漿和設(shè)流速時，無壓力，無液體流出③檢光閘不能復(fù)位④進完大濃度樣品后，進空白相應(yīng)位置也出峰。

起因：①在線過濾堵塞②泵頭下訂單向閥堵?、蹤z測池很臟，也有可能是光路有些堵，再不行可能是燈壽命到了④抹布臟了，需要更換。對策：①在線濾網(wǎng)卸下，置燒杯，加純化水煮沸5-10分鐘后，超一下一般就可以了，如果還堵的話就拿稀泡，還不行，就換新的，這是個消耗品②將泵頭下端向閥卸下，兩個都可能堵死，剛卸下來時豎在耳邊搖晃就聽不到聲音了。只要簡單地拿起洗耳球?qū)蜗蜷y吹一次(注意方向)，吹了沒反應(yīng)可以拿溶劑超聲檢查，但不可用水煮，一般超至在耳邊搖能聽到聲音就不會影響到。③先用溶劑將檢測池沖洗一下，具體的試樣用什么試樣；若不沖洗，將檢測池卸下，看燈能量，若能量還可以(有個幾千)，可能得清洗光路。首先還是請工程師來清潔，因為要清理的零件在探測器下面有一個黑色的碎片，中間有一條縫，而且那一塊的螺絲都是八角的，卸起來很麻煩。④拿出5個樣品盤，可以看到里面有一個黑色凸起(看不清是用電筒)，平時進樣針就是從那個地方吸的。伸手就能卸下來，里面有一個小白圈(用多了自然就黑了)，換一個新的就好了，一般只有10個才能買儀器。

泄漏原因分為兩種：(1)不正確的接觸硬件。如流路管或柱子等更換部件，換接頭接口不匹配，造成漏液。要注意的是，不同的公司有許多柱接頭。PEEK接頭當(dāng)然是一種較好的解決方案，不僅通用性好，而且用手?jǐn)Q也能保證不漏液。值得一提的是現(xiàn)在有很多廠家都出了手?jǐn)Q線，只能用手?jǐn)Q一下，用扳手力量過大造成損壞，所以要把握好力度，避免擰得太緊或太松。變形導(dǎo)致漏液，未對好螺紋，用力過大而引起漏液。

不恰當(dāng)?shù)氖褂萌魹檩斔捅寐┮?，常見的原因是活塞位置緩沖鹽析所致。造成液相泄漏、轉(zhuǎn)子磨損、析出的原因有兩個，一是在使用緩沖鹽溶液時突然加入純而析出，這種錯誤很容易避免，在使用儀器時要注意目前系統(tǒng)的流動相是什么，如果是緩沖鹽，不能直接換純有機相，會導(dǎo)致鹽析出，造成系統(tǒng)色譜柱堵塞。首先需要10%的有機相水。交換純有機相的過程。另外一種是在使用緩沖鹽溶液(無論含量多少)作為流動相時，實驗結(jié)束后不需要換水沖洗，從而使流動相干燥，形成晶體。為避免這種現(xiàn)象發(fā)生，在使用緩沖鹽進行流動相后，必須先用90%的水、1 ml/min的流速沖洗系統(tǒng)至少30分鐘，將緩沖鹽置換出來，再用純有機相沖洗30分鐘，將系統(tǒng)保存在純有機相中，起到保護系統(tǒng)和柱子的作用。