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PCR出現(xiàn)假陰性

不出現(xiàn)擴增條帶。PCR反應的關鍵環(huán)節(jié)有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及Br乙錠的使用， ④PCR循環(huán)條件。尋找原因亦應針對上述環(huán)節(jié)進行分析研究。

模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有Taq酶抑制1劑，③模板中蛋白質沒有消化除凈，特別是染色體中的組蛋白，④在提取制備模板時丟失過多，或吸入酚。⑤模板核酸變性不徹底。在酶和引物質量好時，不出現(xiàn)擴增帶，極有可能是標本的消化處理，模板核酸提取過程出了毛病，因而要配制有效而穩(wěn)定的消化處理液，其程序亦應 固定不宜隨意更改。

PCR有哪些應用領域？

基因表達

通?？赏ㄟ^PCR來檢測不同細胞類型、組織和生物體在特定時間點的基因表達差異。首先，從目標樣品中分離出RNA并將mRNA逆轉錄成cDNA。隨后，通過由PCR擴增的cDNA數(shù)量，確定mRNA的初始水平。這一過程也被稱為逆轉錄PCR。

終點PCR 可通過凝膠里的擴增產(chǎn)物條帶強度對RNA的表達進行定量（一種半定量方法）。例如，對起始cDNA進行連續(xù)稀釋并擴增。通過凝膠電泳使不同起始量的終點PCR得率可視化，然后對條帶強度進行定量，并以管家基因為參照進行標準化，預估擴增靶點的相對表達水平。如今，終點PCR已基本被實時PCR 或qPCR 取代了，因為它們可獲得更可靠和更準確的基因表達定量結果。

梯度PCR儀

把一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件（溫度梯度），通常12鐘溫度梯度，這樣的儀器就叫梯度PCR儀。

工作模式和原理同普通PCR儀一樣，它出了又普通PCR儀的功能外還多了一個梯度退火功能。DNA部分片段的擴增對溫度的控制精度要求特別高，不同的DNA部分片段其退火溫度不一樣，通過計算DNA部分片段中的CG堿基的含量只能初步的判斷出zui優(yōu)退火溫度在 5℃范圍內，如果用普通PCR儀進行研究，需重復擴增很多次，然后做電泳進行分析來確定zui優(yōu)退火溫度。而梯度PCR儀則只需要一次就可以完成，在節(jié)省了時間的同時提高了實驗的可靠性和準確性。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增，這樣節(jié)約成本的同時也節(jié)約了時間和經(jīng)費。在不設置梯度的情況下，梯度PCR儀也可以做普通PCR擴增。

該儀器主要應用于科研，教學機構，醫(yī)學臨床研究，高等院校，病毒分析，疾控中心等。