SOD Assay Kit-WST®使用了Dojindo自己發(fā)明的易溶于水的唑鹽:WST®-1(2-(4-碘)-3-(4-基)-5-(2,4-二磺酸)-2氫-四唑鹽,二鈉鹽),能夠和超氧陰離子反應(yīng)生成水溶性的染料,因此可以簡(jiǎn)便地進(jìn)行SOD的檢測(cè)。WST®-1與超氧陰離子反應(yīng)的劇烈程度比cytochrome C小70倍;因此,它的檢測(cè)靈敏度非常高,并且能夠通過(guò)將樣品用buffer稀釋?zhuān)贡尘暗奈舛然?br />
使用時(shí)一定要根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要購(gòu)買(mǎi)提取試劑盒,硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶(TPX)測(cè)試盒, 如果不是試劑盒,或許能提出RNA,但不能確保其質(zhì)量以及完整性,會(huì)影響RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護(hù)分析、分子等后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。進(jìn)口的提取RNA試劑盒售價(jià)較高,單次實(shí)驗(yàn)費(fèi)用花費(fèi)太大,對(duì)精度要求不高的實(shí)驗(yàn)沒(méi)有必要購(gòu)買(mǎi),且訂貨周期長(zhǎng)的問(wèn)題(如果碰上國(guó)內(nèi)無(wú)貨的時(shí)候,要從國(guó)外發(fā)貨,會(huì)等很長(zhǎng)一段時(shí)間)。

加酶標(biāo):于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌。4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“ ”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。
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