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親和柱——親和層析原理

親和層析原理：利用生物分子之間的專一性識別性或特定的相互作用的分離技術(shù)稱為親和分離技術(shù)。在該技術(shù)中，親和分離過程是通過引入親和配基得以實現(xiàn)的。所謂親和配基，是指具有對生物分子專一識別性或特異相互作用的物質(zhì)。將親和配基固定在不同的介質(zhì)上，可得到不同的親合分離技術(shù)，如固定在層析介質(zhì)上，達到專一性層析分離的技術(shù)稱為親和層析技術(shù)。將親和配基接在分離膜上，得到親和膜分離技術(shù)。

親和柱——親和層析的分離原理

生物體中許多大分子化合物具有與其結(jié)構(gòu)相對應(yīng)的專一分子可逆結(jié)合的特性，如抗原與抗體，酶與底物或抑制，與受體等，這種結(jié)合往往是專一的而且是可逆的，生物分子間的這種結(jié)合力稱為親和力，親和層析的分離原理簡單地說就是通過將具有親和力的兩個分子中的一個固定在不溶性的基質(zhì)（也稱載體）上，利用分子間親和力的特異性和可逆性，對另一個分子進行分離純化。被固定在基質(zhì)上的分子稱為配體，配體與基質(zhì)共價結(jié)合，構(gòu)成親和層析的固定相，稱為親和吸附劑，蛋白質(zhì)的生物特異性可以幫助選擇特異性的配體，一般是目的蛋白質(zhì)與配體結(jié)合而不吸附雜質(zhì)。蛋白質(zhì)吸附后再利用洗脫液的快速變換和加入競爭劑的方法進行洗脫。

親和柱——親和層析的應(yīng)用

抗原和利用抗原、之間高特異的親和力而進行分離的方法又稱為親和層析。例如將抗原結(jié)合于親和層析基質(zhì)上，就可以從中分離其對應(yīng)的。在蛋白質(zhì)工程菌發(fā)酵液中所需蛋白質(zhì)的濃度通常較低，用離子交換、凝膠過濾等方法都難于進行分離，而親和層析則是一種非常有效的方法。將所需蛋白質(zhì)作為抗原，經(jīng)動物后制備，將與適當(dāng)基質(zhì)偶聯(lián)形成親和吸附劑，就可以對發(fā)酵液中的所需蛋白質(zhì)進行分離純化?？乖?、間親和力一般比較強，其解離常數(shù)為108－10?12M，所以洗脫時是比較困難的，通常需要較強烈的洗脫條件?？梢圆扇∵m當(dāng)?shù)姆椒ㄈ绺淖兛乖?、種類或使用類似物等來降低二者的親和力，以便于洗脫。

另外金黃色球菌蛋白A（ProteinA）能夠與球蛋白G（IgG）結(jié)合，可以用于分離各種IgG。