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為什么反相填料C18使用時(shí)建議溶液的PH范圍是2-8？

C18填料是十八烷1基硅1烷鍵合硅膠，pH值超出酸性范圍時(shí)，鍵合相十八烷1基易發(fā)生水解而流失；當(dāng)流動(dòng)相pH超出堿性范圍時(shí)，會(huì)加速硅膠的溶解。這兩種反應(yīng)均是不可逆的反應(yīng)，會(huì)影響填料的性能。

當(dāng)我們極端pH條件下需要使用反相填料時(shí)，建議使用聚合物基質(zhì)的反相填料，如HLB,PSD等，聚合物基質(zhì)的填料pH耐受范圍是1-14，適用范圍非常廣哦。

SPE小柱的使用過(guò)程

下面我們?cè)O(shè)定填料為保留目標(biāo)化合物，分析過(guò)程如下：

1、預(yù)洗活化——除去柱子內(nèi)的雜質(zhì)，飽和平衡柱。依次用強(qiáng)溶劑、弱溶劑（緩沖溶液）進(jìn)行活化。

2、上樣——將樣品（包括分離物和干擾物）用一定的溶劑溶解，轉(zhuǎn)移入柱并使組分通過(guò)吸附劑，吸附劑選擇性的保留分離物和一些干擾物。

3、淋洗——用適當(dāng)?shù)娜軇┝芟次絼?，使先前保留的干擾物選擇性的淋洗掉，分離物富集保留在吸附劑上。

4、洗脫——用小體積的溶劑將被測(cè)物質(zhì)從吸附劑上洗脫下來(lái)并收集。

反相萃取吸附機(jī)理。

反相作用機(jī)理：

對(duì)于通過(guò)非極性作用力吸附在非極性SPE柱上的目標(biāo)化合物，可以用具有非極性性質(zhì)的溶劑洗脫，如氯1仿、環(huán)1己烷、乙1酸乙酯等。廣州碩譜生物科技有限公司Florisil固相萃取柱廠家色譜柱維護(hù)-反相柱樣品zui好將樣品溶解在流動(dòng)相或極性相近的溶劑中。只要溶劑的洗脫強(qiáng)度足以破壞目標(biāo)化合物與吸附劑非極性官能團(tuán)之間的范德華力，就可以順利地將目標(biāo)化合物從SPE柱上洗脫下來(lái)。即便是極性較強(qiáng)的甲1醇，對(duì)于許多化合物來(lái)說(shuō)也具有足夠的非極性作用力將其洗脫。有時(shí)單一溶劑不能把疏水性強(qiáng)的目標(biāo)化合物完全洗脫下來(lái)，則可考慮使用二氯1甲1烷：乙1酸乙酯（1：1，體積比）。

色譜柱維護(hù)-反相柱

樣品

zui好將樣品溶解在流動(dòng)相或極性相近的溶劑中。B：甲1醇流速：1mL/min進(jìn)樣量：5μL柱溫：35℃檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm。如果使用梯度洗脫，則需要將樣品溶解在初始流動(dòng)相或極性相近的溶劑中。樣品溶液不應(yīng)含有任何顆粒物，zui好使用0.5μm或更小粒徑的濾膜過(guò)濾。樣品溶液如果使用強(qiáng)溶劑（例如，流動(dòng)相為水，樣品溶劑為甲1醇），為達(dá)到較好峰形，需要降低進(jìn)樣量（以250x4.6mm規(guī)格為例，小于10μL）。

近二十年來(lái)，固相萃取已逐步發(fā)展成為一種有效的分離和純化手段，在藥品純化、精細(xì)化學(xué)品制備、影像分析、環(huán)境分析、生命科學(xué)等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用。

固萃取又稱固相萃取，液固萃取。分離技術(shù)結(jié)合了選擇性保留和選擇性洗脫等工藝過(guò)程。該方法主要應(yīng)用于樣品的分離提純濃縮，與傳統(tǒng)的液萃取法相比，可提高分析物的回收率，有效分離，減少預(yù)處理過(guò)程，操作簡(jiǎn)便，節(jié)省時(shí)間和人力。

近幾年來(lái)，小柱固相萃取技術(shù)發(fā)展迅速，已在食品、環(huán)境、醫(yī)i藥等行業(yè)得到廣泛應(yīng)用，成為樣品前處理和凈化的有效手段之一。然而，用戶在使用固相萃取柱時(shí)也會(huì)遇到各種各樣的問(wèn)題。

依據(jù)多年的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)將使用過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法整理，方便大家應(yīng)付固相萃取的常見(jiàn)問(wèn)題。

固相萃取操作中常見(jiàn)的問(wèn)題如下：

回收率低

當(dāng)一個(gè)完整的 SPE操作過(guò)程中，目標(biāo)化合物可能存在于出樣溶液、淋洗液、洗脫液或吸附劑中，當(dāng)“目標(biāo)物不能回收或回收率低”現(xiàn)象出現(xiàn)時(shí)，可以向樣品溶液中加入標(biāo)液，然后進(jìn)行完整 SPE操作，分別收集出樣液、淋洗液和洗脫液進(jìn)行分析，首先確定目標(biāo)化合物存在于哪一部分，然后確定問(wèn)題來(lái)自以下幾個(gè)環(huán)節(jié)：

1.目標(biāo)化合物對(duì)吸附劑的保持力不足；

2.目標(biāo)化合物未完全洗除；

3.其它環(huán)節(jié)。